培养条件
培养基:DMEM/F12+1%N2+2%B27
气相:空气,95%;二氧化碳,5%
温度:37摄氏度
细胞描述
细胞描述:本公司培养出品的神经前体细胞(NPC)取自12天EGFP绿色荧光蛋白标记C57小鼠胚胎的端脑,用DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基进行原代培养和传代。
细胞规格:106/管
细胞活力:>90%
细胞代数:原代
细胞运输:干冰运输(冻存管)/ 常温运输(T-25培养瓶)
细胞复苏:
取出冻存管后,立刻放入37℃水浴中,轻轻晃动至完全融化。
用70%酒精消毒冻存管壁外侧后,转入生物安全柜或者超净台中,将管内细胞转移至离心管中,慢慢加入9 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
1000rpm离心5 min。
去掉上清,再加入5ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞传代:
显微镜下观察,当细胞覆盖80%底面积时,进行细胞传代。注意不要等到细胞覆盖100%的时候才传代,那样细胞容易老化。
在生物安全柜或者超净台中,去掉培养基。
用PBS或者生理盐水洗一遍。
加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培养箱中消化3-5min。
轻轻吹打细胞,加入5ml DMEM/F12+10%FBS完全培养基,吹打均匀后,转移到15ml离心管中,1000rpm 离心5min。
离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞冻存:本品使用DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO冻存液。
细胞图片:100x荧光显微镜照片(绿色:细胞持续表达EGFP)
200x荧光显微镜照片(绿色:细胞持续表达EGFP)
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